स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके डीएनए एकाग्रता की गणना कैसे की जाती है?
स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके डीएनए एकाग्रता की गणना कैसे की जाती है?

वीडियो: स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके डीएनए एकाग्रता की गणना कैसे की जाती है?

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वीडियो: स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके डीएनए परिमाणीकरण 2024, नवंबर
Anonim

डीएनए एकाग्रता है द्वारा लगाया गया अनुमान 260nm पर अवशोषण को मापना, A को समायोजित करना260 मैलापन के लिए माप ( द्वारा मापा 320nm पर अवशोषण), गुणा द्वारा कमजोर पड़ने का कारक, और का उपयोग करते हुए वह रिश्ता जो एक A260 1.0 = 50 माइक्रोग्राम / एमएल शुद्ध डीएसडीएनए।

लोग यह भी पूछते हैं कि आप डीएनए की एकाग्रता और शुद्धता कैसे पाते हैं?

मूल्यांकन करना डीएनए शुद्धता , अन्य संभावित संदूषकों का पता लगाने के लिए अवशोषण को 230nm से 320nm तक मापें। सबसे आम शुद्धता गणना 280nm पर पढ़ने से विभाजित 260nm पर अवशोषण का अनुपात है। अच्छी गुणवत्ता डीएनए एक ए होगा260/ए280 1.7-2.0 का अनुपात।

इसी तरह, एक अच्छी डीएनए सांद्रता क्या है? ए अच्छा गुणवत्ता डीएनए नमूने में A. होना चाहिए260/ए280 1.7-2.0 और ए. का अनुपात260/ए230 1.5 से अधिक का अनुपात, लेकिन चूंकि इन दूषित पदार्थों के लिए विभिन्न तकनीकों की संवेदनशीलता भिन्न होती है, इसलिए इन मूल्यों को केवल आपके नमूने की शुद्धता के लिए एक मार्गदर्शक के रूप में लिया जाना चाहिए।

इस संबंध में, नैनोड्रॉप डीएनए एकाग्रता की गणना कैसे करता है?

आप 260 एनएम पर अवशोषण के मूल्य को एक निश्चित कारक से गुणा करते हैं (यह 50 के लिए है डीएनए ) और आप प्राप्त करते हैं डीएनए एकाग्रता . वोला। (ठीक है, यह तकनीकी रूप से 10-मिमी मोटे नमूने का A260 है जिसे 50 से गुणा किया जाता है; the नैनोड्रॉप ए 260 को व्यक्त करता है जैसे कि नमूना 10 मिमी मोटा था, जैसे एक मानक क्युवेट में)।

हमें अपने डीएनए को मापने के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग क्यों करना पड़ा?

ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर है न्यूक्लिक एसिड की औसत सांद्रता निर्धारित करने में सक्षम डीएनए या आरएनए एक मिश्रण में मौजूद है, साथ ही साथ उनकी शुद्धता भी। का उपयोग करते हुए बीयर-लैम्बर्ट कानून आईटी है अवशोषित प्रकाश की मात्रा को अवशोषित करने वाले अणु की सांद्रता से संबंधित करना संभव है।

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