वीडियो: पीसीआर उत्पाद शुद्धिकरण का उद्देश्य क्या है?
2024 लेखक: Miles Stephen | [email protected]. अंतिम बार संशोधित: 2023-12-15 23:36
शुद्धिकरण a. से DNA का पीसीआर प्रतिक्रिया आमतौर पर डाउनस्ट्रीम उपयोग के लिए आवश्यक है, और एंजाइम, न्यूक्लियोटाइड, प्राइमर और बफर घटकों को हटाने की सुविधा प्रदान करती है। परंपरागत रूप से यह कार्बनिक निष्कर्षण विधियों का उपयोग करके पूरा किया गया था, जैसे कि फिनोल क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण, इसके बाद इथेनॉल वर्षा।
सवाल यह भी है कि पीसीआर उत्पादों को शुद्ध करना क्यों जरूरी है?
आपको पीसीआर उत्पादों को शुद्ध करें बंधन की सफलता को अनुकूलित करने के लिए अप्रयुक्त प्राइमरों, न्यूक्लियोटाइड्स और एंजाइमों से छुटकारा पाने के लिए, जो बनाए रखेगा और अनुक्रमित करेगा उत्पाद का पीसीआर . प्रति शुद्ध NS पीसीआर उत्पाद आकार अपवर्जन क्रोमैटोग्राफी का उपयोग किया जाता है।
इसके अतिरिक्त, मुझे पीसीआर के बाद क्या करना चाहिए? रिकवरी को अधिकतम करने के लिए, रिटेंटेट कप को 10 से 20 डिग्री सेल्सियस ते या पानी से दो बार कुल्ला करें। अंतिम पीसीआर प्रतिक्रिया में प्रवर्धित डीएनए का एक माइक्रोग्राम तक हो सकता है जिसका उपयोग विभिन्न आणविक जीव विज्ञान अनुप्रयोगों के लिए किया जा सकता है। ये अनुप्रयोग कमोबेश इसके अवशिष्ट घटकों के प्रति संवेदनशील हो सकते हैं पीसीआर प्रतिक्रिया मिश्रण।
कोई यह भी पूछ सकता है कि आप पीसीआर उत्पादों को कैसे साफ करते हैं?
शास्त्रीय विधियों का प्रयोग किया जाता है साफ यूपी पीसीआर उत्पाद अनुक्रमण से पहले जेल वैद्युतकणसंचलन, इथेनॉल वर्षा और स्तंभ क्रोमैटोग्राफी शामिल हैं। काफी प्रभावी होने पर, समानांतर में कई नमूनों को संसाधित करते समय ये विधियां जल्दी से बोझिल हो सकती हैं और नमूना हानि की अलग-अलग डिग्री प्रदर्शित करती हैं।
डीएनए को साफ क्यों करना चाहिए?
हम साफ यूपी डीएनए बफर लवण, एंजाइम या अन्य पदार्थों को हटाने के लिए जलीय घोल से जो डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों को प्रभावित कर सकते हैं। उदाहरणों में शामिल हैं पीसीआर प्रतिक्रिया साफ यूपी, साफ ऊपर प्रतिबंध के बाद पचता है और साफ जीनोमिक या प्लास्मिड से ऊपर डीएनए सेलुलर प्रोटीन/मलबे से दूषित।
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पीसीआर में प्राइमर का क्या कार्य है?
पीसीआर प्राइमर एकल फंसे डीएनए (लंबाई में 15-30 न्यूक्लियोटाइड्स) के छोटे टुकड़े होते हैं जो डीएनए अनुक्रमों के पूरक होते हैं जो ब्याज के लक्षित क्षेत्र को झुकाते हैं। पीसीआर प्राइमरों का उद्देश्य एक "मुक्त" 3'-ओएच समूह प्रदान करना है जिसमें डीएनए पोलीमरेज़ डीएनटीपी जोड़ सकता है
पीसीआर के 10 चक्रों के बाद डीएनए की कितनी प्रतियां होती हैं?
पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) प्रत्येक चक्र में दोहरे फंसे डीएनए टुकड़ों की संख्या दोगुनी हो जाती है, ताकि n चक्र के बाद आपके पास डीएनए की 2^n (2 से n:th शक्ति) प्रतियां हों। उदाहरण के लिए, 10 चक्रों के बाद आपके पास 1024 प्रतियाँ होती हैं, 20 चक्रों के बाद आपके पास लगभग 10 लाख प्रतियाँ होती हैं, आदि
क्या पीसीआर उत्पादों को शुद्ध करने के अन्य तरीके हैं?
उन अनुप्रयोगों के लिए जिन्हें पीसीआर क्लीन-अप या पीसीआर परिणामों के सत्यापन की आवश्यकता होती है, आमतौर पर दो तरीकों का पालन किया जाता है: एक कॉलम का उपयोग करके पीसीआर उत्पाद अलगाव, और एक agarose जेल से जेल शुद्धिकरण
पीसीआर के लिए आवश्यक अभिकर्मक क्या हैं और प्रत्येक का कार्य क्या है?
पीसीआर में उपयोग किए जाने वाले पांच बुनियादी अभिकर्मक या सामग्री हैं: टेम्पलेट डीएनए, पीसीआर प्राइमर, न्यूक्लियोटाइड, पीसीआर बफर और टाक पोलीमरेज़। प्राइमर आमतौर पर जोड़े में उपयोग किए जाते हैं, और दो प्राइमरों के बीच डीएनए को पीसीआर प्रतिक्रिया के दौरान बढ़ाया जाता है
पीसीआर के घटक क्या हैं?
पीसीआर प्रतिक्रिया के मूल घटकों में एक डीएनए टेम्प्लेट, प्राइमर, न्यूक्लियोटाइड, डीएनए पोलीमरेज़ और एक बफर शामिल हैं। डीएनए टेम्प्लेट आमतौर पर आपका नमूना डीएनए होता है, जिसमें डीएनए क्षेत्र को बढ़ाना होता है